自成立以來的幾十年里 ，蛋白質(zhì)電泳的核心原則并沒有改變。然而，改進和改進繼續(xù)使其成為生命科學(xué)中**重要的技術(shù)之一。二維（2D）蛋白質(zhì)電泳作為一種簡單，廉價且易于分離的混合物中蛋白質(zhì)的工具仍然是**的。對于復(fù)雜的生物樣品，例如組織勻漿，尤其如此，低豐度蛋白質(zhì)（通常具有特定的生物學(xué)意義）可能難以從中抽出。
在電泳期間，通過凝膠基質(zhì)的電流的力使得樣品混合物中的不同蛋白質(zhì)種類以不同的速率遷移通過凝膠。電荷，大小，形狀，添加修飾（例如磷酸基團）和多聚化的差異都可以影響蛋白質(zhì)在電泳期間的遷移速率。在電泳之前，大多數(shù)蛋白質(zhì)用去污劑如十二烷基硫酸鈉（SDS）變性，以幫助蛋白質(zhì)松弛并用負電荷覆蓋它們。當用SDS包被時，蛋白質(zhì)主要根據(jù)大小而不是根據(jù)電荷或形狀遷移。下面是一些新工具，可以在享受這項舊技術(shù)的諸多好處時充分利用。
預(yù)制板坯凝膠可節(jié)省時間
幾十年來，Bio-Rad一直是電泳工具的主要供應(yīng)商，其電泳生產(chǎn)線不斷創(chuàng)新。“Bio-Rad是**個推出預(yù)制凝膠的公司對于市場而言，這將永遠簡化和標準化電泳在蛋白質(zhì)研究中的應(yīng)用，“Bio-Rad的電泳和印跡市場經(jīng)理Christopher Belisle博士說。“Bio-Rad將繼續(xù)在2010年推出Mini-Protean和Criterion TGX和TGX無污染凝膠。這些預(yù)制凝膠有mini和midi格式。”TGX凝膠的運行時間**快（迷你15分鐘） ，midi 20-25分鐘，以及Western印跡（15-30分鐘）的**快轉(zhuǎn)移時間。使用Laemmli緩沖區(qū)運行時不需要特殊緩沖區(qū)。TGX-Stain Free凝膠還可讓您在20-25分鐘內(nèi)運行和成像凝膠。“使用黃金標準的Laemmli緩沖液時，市場上沒有其他凝膠可以快速運轉(zhuǎn)或轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)，”Belisle說。“TGX無污染技術(shù)僅由Bio-Rad提供，進一步增強了我們對研究人員的成果時間的承諾。”Belisle認為，蛋白質(zhì)電泳的主要發(fā)展將來自工作流程的改進，使流程更加高效。“這些新的[預(yù)制和無染色]凝膠使研究人員能夠?qū)Ｗ⒂诳茖W(xué)研究，并在更短的時間內(nèi)完成更多的工作，并獲得更可重復(fù)的結(jié)果，”Belisle說。
Invitrogen還在其NuPAGE®和Novex®系統(tǒng)中提供預(yù)制凝膠。此外，他們的ZOOM®臺式蛋白質(zhì)組學(xué)系統(tǒng)為蛋白質(zhì)分析提供了一體化解決方案。它將樣品分餾，1D和2D凝膠電泳以及與質(zhì)譜相容的染色結(jié)合在一起。
免于平板凝膠
當使用SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)用于進一步分析時，例如質(zhì)譜法之前的樣品制備方法，開始從成品凝膠中切除條帶的棘手過程。收集通過電泳分離的蛋白質(zhì)的另一種方法是使用分餾系統(tǒng)。蛋白質(zhì)發(fā)現(xiàn)Gelfree 8100分餾系統(tǒng)旨在用可編程的液相分餾回收代替電泳凝膠帶和點切割。“與普通平板凝膠PAGE一樣，[Gelfree 8100分餾系統(tǒng)]按大小分離復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物，但該系統(tǒng)的創(chuàng)新方面是它使用水平管 - 凝膠盒格式，每端有液體儲存器，以簡化樣品加載和餾分收集，“蛋白質(zhì)發(fā)現(xiàn)營銷總監(jiān)Matthew Wygant說。“從Gelfree系統(tǒng)獲得良好的蛋白質(zhì)電泳結(jié)果所需的**專業(yè)技能是良好的移液技術(shù)。”兩種系統(tǒng) - 傳統(tǒng)平板凝膠和Protein Discovery的Gelfree系統(tǒng) - 使用SDS-PAGE根據(jù)大小分離蛋白質(zhì)混合物。但是，Gelfree系統(tǒng)針對樣品制備進行了優(yōu)化。
從電泳到質(zhì)譜
Wygant認為，蛋白質(zhì)電泳**令人興奮的**新發(fā)展涉及其作為質(zhì)譜分析的樣品制備方法。“近年來，質(zhì)譜儀器的速度，靈敏度和分辨率不斷提高，許多蛋白質(zhì)研究人員現(xiàn)在可以使用真正強大的質(zhì)譜系統(tǒng)，”Wygant說。“但是他們發(fā)現(xiàn)他們?nèi)匀粺o法很好地閱讀低豐度蛋白質(zhì)，而所有有趣的信號和調(diào)節(jié)正在進行中。在沒有某種預(yù)分餾的情況下分析的蛋白質(zhì)混合物是如此復(fù)雜，以**于在較豐富的信號中，次要元素（感興趣的元素）丟失。但非電泳預(yù)分割方法似乎不夠具體，因此，研究人員**終沒有從質(zhì)譜中得到足夠的信號進行自信的分析。“但從歷史上看，使用平板凝膠電泳作為制備系統(tǒng)具有挑戰(zhàn)性。從凝膠中切除的條帶可能導(dǎo)致很少或沒有蛋白質(zhì)。“在Gelfree之前，確實沒有一種可靠，高產(chǎn)的方法可以使用凝膠電泳來制備用于質(zhì)譜分析的蛋白質(zhì)，”Wygant說。
使用電泳作為質(zhì)譜分析的準備方法的一個未來障礙是尋找SDS等洗滌劑的替代品。“蛋白質(zhì)電泳幾乎總是在表面活性劑的幫助下進行，表面活性劑幾乎總是SDS，”Wygant說。“除了其可用于提取和溶解的侵蝕性洗滌劑性質(zhì)之外，SDS當然也用于向蛋白質(zhì)施加凈負電荷，用于SDS-PAGE中基于大小的分級分離。但是如果你要使用質(zhì)譜，SDS會引起問題，所以你必須擺脫它。有各種有效的協(xié)議，并沒有那么難，但你仍然需要在工作流程中遇到這種情況，你必須從所有樣本中刪除SDS。在將來，
